La presencia de toxinas marinas en moluscos puede provocar graves intoxicaciones alimentarias. El control de toxinas marinas en moluscos bivalvos es por tanto necesario para la comercialización de estos productos. Los actuales planes de muestreo llevan a cabo controles semanales de diferentes puntos de las zonas de producción. La recolección de moluscos estará permitida siempre y cuando resultados de tal muestreo determinen niveles de toxinas por debajo de límites legales permitidos. Actualmente están legisladas las toxinas paralíticas (saxitoxinas), amnésicas (ácido domoico) y lipofílicas ( ácido okadaico y derivados, yesotoxinas, pectenotoxinas y azaspirázidos).
El bioensayo en ratón se ha usado para el control de toxinas lipofílicas en moluscos durante mucho tiempo. Sin embargo, problemas éticos y dudas generados sobre los resultados obtenidos con este método han originado gran preocupación en el sector en los últimos años. En el análisis de toxinas lipofílicas se usan 3 ratones por muestra. La muerte de 2 de los 3 ratones indica la presencia de toxinas por encima de los niveles permitidos (160 µg/kg para ácido okadaico, dinofisistoxinas y pectenotoxinas juntas).
Requisitos legales y la presión social para evitar el uso de animales de experimentación, junto con la falta de fiabilidad de los resultados producidos por el método biólogico han llevado a la prohibición del bioensayo en ratón en el Reglamento de la Comisión (UE) No. 15/2011.
Los estados miembros deberán de implementar la cromatografía líquida/espectrometría de masas (LC-MS/MS) como método de referencia, u otro método que cumpla con la legislación a partir del 31 de Diciembre del 2014.
La legislación Europea (No. 2074/2005) también permite el uso de otros métodos analíticos siempre y cuando cumplan el criterio de funcionamiento establecido por el laboratorio de referencia y proporcionen un nivel equivalente de protección de la salud.
Los países productores de moluscos bivalvos que deseen exportar a la UE también deberán de seguir los criterios establecidos en las legislaciones citadas.
OkaTest, ensayo de inhibición de la fosfatasa, cumple los requisitos establecidos por el laboratorio Comunitario de Referencia para Toxinas Marinas y la legislación Europea No. 2074/2005, y puede ser usado para el análisis de toxinas del grupo del ácido okadaico - click aquí.
OkaTest es un kit para la determinación cuantitativa de ácido okadaico (OA) y otras toxinas del grupo, incluyendo DTX1, DTX2 and DTX3, mediante un ensayo colorimétrico basado en la inhibición de una enzima fosfatasa. Este método es aplicable a especies de moluscos bivalvos tales como los mejillones, almejas, ostras, vieiras, berberechos, etc. Más info aquí.
La toxicidad del ácido okadaico y DTXs esta directamente relacionada con su actividad inhibitoria frente a la familia de las proteínas serina-treonina fosfatasas (PP) relacionadas estructuralmente. Esta fuerte capacidad inhibitoria se usa para determinar el contenido de toxinas del grupo del ácido okadaico mediante un ensayo realizado en una microplaca y usando un substrato colorimético. En condiciones normales, la fosfatasa es capaz de hidrolizar un sustrato específico obteniéndose un producto que puede ser detectado a 405 nm. En presencia de toxinas del grupo del ácido okadaico se producirá una inhibición de la actividad enzimática proporcional a la cantidad de toxina presente en la muestra. Mediante la utilización de una curva de calibrado se pueden obtener los valores de concentración de toxina presentes en la muestra analizada.
OkaTest ha sido validado por ZEULAB (Smienk et al 2012, Toxins 5, 339-352) y a través de un estudio colaborativo internacional en el que han participado un total de 16 laboratorios de 11 países diferentes son resultados satisfactorios (Smienk et al.2013, JAOAC, 96,1, 77-85).
